試劑組成
操作程序
1.加樣反應:取出所需量的反應板條,每孔加樣本稀釋液(5號液)2滴,再分別加入待檢的血清樣本10ul,混勻。同時設陰性、陽性及空白對照各1孔,陰性、陽性對照與待檢樣本同步處理,空白對照孔僅加入樣本稀釋液(5號液)2滴。37℃避光反應30分鐘后甩去孔內液體,每孔加洗滌液(2號液)1滴,立即用蒸餾水注滿,靜置30秒后甩去,再直接用蒸餾水洗滌四次,甩去,拍干。
2.加酶反應:除空白對照孔外其余每孔加酶結合物(1號液)2滴,37℃避光反應30分鐘后甩去孔內液體,如上洗滌,拍干。
3.顯色反應:加底物(3號液)和顯色劑(4號液)各1滴,混勻,37℃下避光顯色10分鐘。加終止液(6號液)1滴,混勻,終止反應(加終止液后藍色會變為黃色)并觀察結果。
結果判斷
1.肉眼觀察:陰性對照接近無色,陽性對照呈明顯黃色,表示試驗有效。待檢孔接近無色表示該標本為陰性,待檢孔呈明顯黃色表示該標本為陽性。
2.儀器判斷:以空白對照調零用酶標儀于450nm(620nm作參比波長)讀取O.D值,待檢孔O.D值大于陰性對照2.1倍者為陽性。當陰性對照O.D值低于0.08時按0.08計算。
注意事項
1.試劑盒在2-8℃下保存,每次取出時先平衡至室溫后使用。滴瓶每次用后一定要將蓋擰緊,各瓶蓋之間切不可混用。各試劑盒之間不可混用。
2.洗滌時將蒸餾水加滿孔內,每次停放三十秒鐘,甩去孔內液體。禁用自來水等其它水源。
3.為提高試驗的可比性,建議使用儀器判讀結果。
4.如有條件,*好使用水浴箱孵育。
